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  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 09. TUNEL staining

    목차

    １.   서론
     
    ２.   실험 목적
     
    ３.   실험 방법
    가.    실험 재료(도구)
    1)      샘플
    2)      시약
    3)      장비
    나.    실험 방법
     
    ４.   실험 결과
     
    ５.   논의 (고찰)
     
    ６.   참고문헌

    본문내용

    면역 염색법(Immunostaining)은 세포 또는 조직에서 특정 분자, 단백질 등을 항체를 이용해 가시화하는 방법으로, 특정 단백질에 선택적으로 결합하는 항체를 세포나 조직에 반응시킨 후, 항체의 결합 반응 후 그 항체의 위치를 관찰하는 생화학적인 방법이다. 면역염색법의 종류로는 면역 조직 화학 염색법 (immunohistochemistry, IHC), 면역 세포 화학 염색법 (immunocytochemistry, ICC), 면역 형광법 (immunofluorescence, IF) 등이 존재한다.
    면역 조직 화학 염색법 (IHC)은 특정 타겟 단백질이 고정된 조직 내에서 발현하는지, 발현한다면 어디 위치에서 발현하는지에 대해 조직에 있는 특정 항원에 결합하는 특정 항체를 이용하여 염색하는 방법이다. IHC는 이차항체 염색 이후 발색제인 DAB 등 을 이용하여 발색하는 방법으로 보통 peroxidase에 의해 산화되어 갈색으로 발색된다. 최근에는 갈색으로 반응하는 DAB 반응 말고도 다양한 종류의 kit들이 개발되고 있다.
    면역 세포 화학 염색법 (ICC)은 IHC와 거의 유사하지만, IHC가 조직을 염색하여 관찰한다는 점과는 달리, 세포를 염색하여 관찰하는 면역염색법이다.
    면역 형광법 (IF)은 조직 항체의 일차 항체를 결합시키고, 형광 탐침이 부착된 2차 항체를 1차 항체와 선택적으로 결합시키는 방법으로, 형광 현미경을 통해 관찰한 시료 내에서 여러 개의 항원을 각각 가시화 할 수 있다는 장점을 지닌 실험법이다. 면역 형광법을 통해서, 조직에서의 특정 단백질의 발현위치, 발현 정도를 확인할 수 있다. IF는 IHC와 거의 유사한 프로토콜을 지니고 있는데, 차이점으로는 IHC와 달리 이차 항체로 형광이 달린 항체를 사용하며, H2O2 incubation 과정이 필요하지 않는다는 점이 존재한다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 05. Annexin V/PI/DAPI(Hoechst 33258) staining

    목차

    １.   서론
     
    ２.   실험 목적
     
    ３.   실험 방법
    가.    실험 재료(도구)
    1)      샘플
    2)      시약
    3)      장비
    나.    실험 방법
     
    ４.   실험 결과
     
    ５.   논의 (고찰)
     
    ６.   참고문헌

    본문내용

    세포사(Cell death)의 종류에는 외부 자극 등에 의해 갑자기 발생하는 세포 괴사(Necrosis), 사망 신호, 성장인자의 결핍 등의 의해 예정되어 세포가 죽어가는 세포자연사(Apoptosis)가 존재한다. 이 외에서도 세포 내부의 물질이 세포 스스로에 의해 제거되어 발생하는 자가포식(Autophagy) 등의 다양한 세포사가 존재한다. 이처럼 여러 존재하는 세포사들 중, 세포 괴사와 세포자연자를 Annexin V, PI, DAPI, Hoechst 33258 등의 다양한 염색법을 이용하여 세포 핵의 모양과 염색 여부의 관찰을 통해 세포 생존 여부, 죽음의 종류를 구별해보고자 한다.

    세포 괴사(Necrosis)는 외부의 강한 물리적인 힘, 화학 물질 등에 의한 심한 자극으로 인해 세포가 죽어가는 과정이며, 대표적인 예시로 화상과 동상 등이 있다. 현미경을 통해 세포 괴사가 일어나는 세포를 관찰해보면, 세포가 부풀어올라, 세포막과 세포 소기관들이 부풀어 올라 터지게 되며, 항체에 의한 염증반응이 일어난다. 세포 괴사가 일어나게 되면, 핵은 그렇지 않은 세포에 비해 크기가 커지며, 핵막의 구분이 불명확해지고, 염색질이 부분적으로 응축되는 현상이 발생한다.

    세포자연사(Apoptosis)는 괴사와는 다르게, 일련의 세포 변화에 의해 일반적으로 진행되는 능동적인 과정으로, 생리학적으로 세포 증식과 세포 발달이 일어나는 중에 조직에서 일정한 세포를 유지하기 위한 반응이고, 성숙한 조직의 우지나 배아 발달 등에서 중요한 역할을 수행하는, 신체 내에서 매우 주요한 과정이다. 세포 자연사는 사망 신호, 성장인자의 결핍, 발생 과정의 프로그램 등의 다양한 원인으로 야기되며, 이 때, 세포의 죽음을 실행시키는 캐스페이즈(caspase) 유전자군과 캐스페이즈의 활동을 조절 해주는 Bcl-2 집단 유전자군에 의해 조절된다. 세포자연사가 진행 중인 세포를 현미경을 통해 관찰해보면, DNA의 분절화와 염색질의 응축이 일어나고, 핵의 분절화가 일어나며, 결과적으로 세포의 분절화가 일어나 세포사멸체를 형성하는 모습을 관찰할 수 있다. 이때 형성된 세포사멸체는 식세포의 식균작용을 통해 소멸된다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 02. apoptosis, Autophagy와 인간의 질병

    목차

    1. Apoptosis
    2. Autophagy
    3. 참고문헌

    본문내용

    1. Apoptosis
    세포자연사(Apoptosis)는 괴사와 다르게 일련의 세포 변화에 의해 진행되는 능동적인 과정으로, 과정이 시작되면 DNA의 분절화, 염색질의 응축, 핵의 분절화 그리고 세포의 분절화가 일어나 세포사멸체를 형성하고, 형성된 세포사멸체는 식세포의 식균작용을 통해 소멸된다. 인체에서는 24시간 당 약 3000억~4000억 개의 오래된 혈액 세포나 간세포, 표피세포가 세포자연사에 의해 제거되고, 새로운 세포가 생성되고 있다. 세포에서 세포자연사의 메커니즘에 이상이 생기면, 암, 자가면역질환..

    <중 략>

    암세포(Cancer Cell)은 무질서하게 증식하고, 원래 본인에게 할당되어 있던 분화 기능을 수행하지 않고, 자신의 담당 영역이 아닌 여러 장소에서 증식하며(전이), 다양한 조직과 장기의 정상적인 기능에 문제를 발생시키는 것이 특징이다. 이런 암세포의 중요한 특징인 이상한 증식이 가능하게 하는 것은, 암세포가 지닌 세포자연사를 회피하는 메커니즘과 연관이 있다.

    <중 략>

    후천성 면역결핍증(AIDS)은 인체 내에서 면역 기능을 담당하는 CD4+ T lymphocyte가 HIV바이러스에 의해 죽으면서, 세포의 수가 적어져 면역 기능이 저하되어, 결핵 등의 다양한 감염병에 취약해지는 질병이다.

    <중 략>

    2. Autophagy
    자가포식(autophagy)은 그리스어로 ‘스스로 먹는다’는 뜻으로, 2형 세포계획사로도 불리고 있다. 이런 자가포식은 세포 사멸의 기전이면서, 동시에 세포 스스로에게 에너지와 대사물질을 제공하는 것이 가능한 양면성을 지닌 작용이기에 세포 생존에 기여하는 역할도 수행한다.

    <중 략>

    암은 악성 종양으로, . 종양형성의 주요원인은 방사능, 산화적 스트레스, 노화 등으로 부터 발생하는 DNA손상과 돌연변이이다. 자가포식 작용은 종양형성에서 첫째로, 종양억제자로 세포사멸은 유도하고, 둘째로 종양형성기전에서 세포사멸억제 역할을 담당한다.

    출처 : 해피캠퍼스