[태그:] BCA Assay

목차

Ⅰ. 기본정보
Ⅱ. 서론
Ⅲ. 실험재료 및 방법
Ⅳ. 실험 결과 및 결론
Ⅴ. 고찰
Ⅵ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 기본정보
실험 제목: 단백질 검출
실험 목적: 단백질에 대해서 알고, BCA assay, 뷰렛반응, 닌히드린 반응을 통해 단백질을 검출한다.

Ⅱ. 서론
1. 단백질(protein)
단백질은 아미노산이 펩티드 결합으로 연결된 복잡한 사슬구조의 고분자 물질이다. 아미노산은 탄소에 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)가 붙어있는 것이 특징이다. 자연계의 20가지의 아미노산은 아미노산이 가지는 R기의 종류에 따라 구분된다. 단백질의 존재를 증명하기 위해서는 발색반응을 사용할 수 있는데, 단백질 분자에 포함된 반응기가 특수한 시약과 어울려서 나타내는 반응이다(김기태 외 4명. 2009).

2. BCA assay
알칼리의 조건에서 단백질의 펩타이드 결합과 반응하여 Cu2+가 Cu+로 환원된다. 이후 2분자의 Bicinchoninic acid(BCA)가 환원된 Cu+와 배위 결합해 562nm에서 최대 흡광도를 가지는 강한 보라색을 띤다. Cu+의 생성은 곧 단백질의 농도와 비례하기 때문에 알려지지 않은 샘플의 단백질 함량은 알려진 단백질 표준과 비교하여 분광광도법으로 알아낼 수 있다(Walker, J. M.. 2009).

3. 뷰렛반응
뷰렛 시약은 단백질과 폴리펩티드를 검출하기 위해 사용하는 시약이다. 뷰렛시약은 원래 푸른색을 나타내나, 단백질과 반응하면 자주색을 나타내고 짧은 폴리펩티드와 반응하면 분홍색으로 변한다(김기태 외 4명. 2009). 뷰렛은 알칼리성 CuSO4(2가의 구리이온)와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 두 개 이상의 펩티드 결합을 가진 화합물도 마찬가지로 유사한 착화합물을 만들며, 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색을 나타낸다. 착화합물의 색은 1-2시간 정도는 안정하게 유지되나, 그 이상에서는 점점 색도가 증가한다(김기태 외 4명. 2009).

출처 : 해피캠퍼스

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
단백질은 세포보다도 훨씬 작다. 육안으로는 당연하고 현미경으로도 일일이 몇 개가 있는지 세기는 힘들만큼 작기 때문에 단백질을 정량할 수 있는 분광 광도법이 유용하게 쓰인다. 분광광도법은 효소반응을 연구하고 효소에 대한 약물의 효과를 평가하는 데에 이용될 수 있다. 예를 들어 클라불란산은 페니실린 G를 페니실로산으로 변환시키는 베타-락타메이즈 효소의 작용을 저해시키는데, 클라불란산의 농도를 높여가면서 흡광도를 측정함으로써 약물의 농도가 증가됨에 따라 약물의 효소 저해에 따른 흡광도의 감소를 관찰하여 클라불란산의 미지의 양을 측정할 수 있다.

출처 : 해피캠퍼스

목차

1. Title
2. Date
3. Name
4. Purpose
5. Materials
6. Methods
7. Results
8. Discussions
9. Project
10. Reference

본문내용

1. Title
Protein quantification : BCA assay

2. Date

3. Name

4. Purpose
단백질 정량 분석 방법 중 colorimetric method의 일종인 BCA assay를 수행하여 표준 단백질의 흡광도를 이용한 표준곡선을 그린 후, 미지의 단백질 시료 농도를 구해본다.

5. Materials
Extracted proteins (from MCF-7 cells), Bovine serum albumin (BSA) protein, nuclease free water, BCA reagent A & B, micropipette, tip, rack, 96well plate, 1.5㎖ ep-tube, tissue, 70% EtOH, incubator, plate reader

6. Methods
[1] Preparation of standard protein (BSA)
2㎎/㎖ BSA stock (조별로 80㎕씩 제공됨)으로 serial dilution을 진행하여 7개의 ep-tube에 각각 0, 0.025, 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2㎎/㎖ 농도의 BSA을 최소 30㎕씩 준비한다.

2㎎/㎖
80㎕(2㎎/㎖ BSA)
30㎕
1㎎/㎖
50㎕(2㎎/㎖ BSA) + 50㎕(D.W)
60㎕
0.5㎎/㎖
40㎕(1㎎/㎖ BSA) + 40㎕(D.W)
40㎕
0.25㎎/㎖
40㎕(0.5㎎/㎖ BSA) + 40㎕(D.W)
40㎕
0.125㎎/㎖
40㎕(0.25㎎/㎖ BSA) + 40㎕(D.W)
60㎕
0.025㎎/㎖
20㎕(0.125㎎/㎖ BSA) + 80㎕(D.W)
100㎕
0㎎/㎖
40㎕(D.W)
40㎕

출처 : 해피캠퍼스