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[태그:] CCK-8 assay

  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 04. MTT assay (WST-8 assay)

    목차

    １.   서론
     
    ２.   실험 목적
     
    ３.   실험 방법
    가.    실험 재료(도구)
    1)      샘플
    2)      시약
    3)      장비
    나.    실험 방법
     
    ４.   실험 결과
     
    ５.   논의 (고찰)
     
    ６.   참고문헌

    본문내용

    １. 서론
    Tetrazolium은 dehydrogenase 등의 효소에 의해 쉽게 환원되어 유색의 formazan을 형성한다. 이러한 원리로 가장 널리 사용되는 MTT tetrazolium은 노란색 수용성 기질로, 미토콘드리아에 있는 reductase에 의해 환원되어 청자색을 띄는 비수용성의 MTT formazan 이라고 불리는 crystal을 형성한다. 따라서 세포사멸에 의해 미토콘드리아가 제 기능을 하지 못하게 되면 MTT를 처리해도 formazan을 형성하지 못하게 된다. 이러한 특징을 활용하여 세포 성장 및 독성을 측정하는 MTT assay이 존재한다. MTT assay는 약리학, 독성학 등의 다양한 실험실에서 특정 물질이, 특정한 생물학적, 생화학적 기능을 50% 억제하는데 필요한 양을 나타내는 IC50을 측정하기 위한 용도로 널리 사용되고 있다.

    ２. 실험 목적
    MTT tetrazolium을 이용하여 세포 사멸에 따른 미토콘드리아의 활성도 차이를 관찰한다.

    ３. 실험 방법
    가. 실험 재료(도구)
    ( * 표시는 이전에 작성한 실험 보고서를 참고한다.)
    ① 샘플
    – 마우스 종양 세포 4T1(Triple Negative Breast Cancer(TNBC))*
    ② 시약
    – cell culture media (10% FBS, 1% P/S) *
    – CCK-8(#K1013,APExBIO)
    CCK-8는 ‘Cell Counting Kit 8’의 약자로, CCK-8 속 함유되어 있는WST-8을 이용하여 세포 생존율, 세포 독성 등을 측정하는 물질이다. WST-8는 테트라졸리움(Tetrazolium) 계열의 구성물질로, 살아있는 세포에서 미토콘드리아 탈수소효소(dehydrogenase)에 의해 환원되어서 오렌지 계열의 포르마잔(formazan)을 형성한다. 이때, 생성된 포르마잔은 수용성이고, 쉽게 용해되는 특성을 지니고 있다.
    즉, 미토콘드리아의 활성 측정을 통해서, 실험에 사용한 화합물이 세포에 얼마나 독성을 나타내는지 확인하는 것이다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 인천대학교 나노바이오실험(2) A+ 자료) 6. MTT assay를 통한 세포 viability 측정 (엑셀 계산과정 포함)

    목차

    1. Abstract

    2. Introduction

    3. Materials & Methods

    4. Results
    1) DOX 농도에 따른 세포 viability를 구하라.

    5. Discussions
    1) 생존 세포수가 MTT assay를 통한 UV 흡광도와 비례하는지 확인하고 그렇지 않았다면 그 이유를 예측해보아라.

    6. References

    + 엑셀 계산 과정

    본문내용

    Ⅰ. Abstract
    이번 실험에서는 MTT assay를 이용하여 항암제로부터 살아있는 세포의 생존율을 구하였다. 이를 통해 암세포에 대한 doxorubicin의 독성평가를 해보았다. MTT assay는 살아있는 세포에서만 환원 반응이 일어나는 MTT에 의한 세포 대사 활성을 평가하는 방법으로, 항암제를 투여하지 않은 배지와 농도별로 항암제를 처리한 배지의 UV 흡광도 값을 비교하여 세포의 생존 비율(cell viability)을 계산할 수 있다. 실험 결과, DOX의 농도(첨가된 질량)가 untreated, 0.2 ug, 0.4 ug, 0.8 ug으로 증가할 때, UV의 흡광도는 감소하는 경향을 보였다. 이를 바탕으로 백분율로 나타낸 cell viability는 untreated sample에서 100%라고 했을 때, 처리된 DOX의 농도가 증가할수록 cell viability가 55.12%, 28.32%, 26.21%로 점점 감소하였다. 따라서 실험을 통해 DOX의 농도가 높아질수록 암세포에 대한 독성은 효과적으로 작용한다는 것을 알 수 있었다.

    Ⅱ. Introduction
    – 실험 목표 : 항암제의 암세포에 대한 독성 평가를 위하여 대표적인 세포 생존성 측정 방법인 MTT assay의 원리를 이해하고 실험 방법을 배운다.
    1. MTT assay
    : 세포 대사 활성을 평가하기 위한 colorimetric assay로, 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT tetrazolium을 청자색의 비수용성의 MTT formazan (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용한다.

    출처 : 해피캠퍼스