지식참고자료

[태그:] ELISA

  • 생명과학실험 ELISA 실험 레포트

    목차

    1. Introduction
    ◼ 실험 목적
    항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하는 ELISA방법 및 원리에 대해 이해하고,
    antibody농도에 따른 흡광도를 나타내는 4PL curve를 이용해 antibody가 antigen
    에 얼마나 강하게 붙었는지 알 수 있다.
    ◼ 이론
    ① 항원-항체반응
    ② ELISA
    1) Direct ELISA (직접 ELISA)
    2) Indirect ELISA
    3) Sandwich ELISA
    4) Competitive ELISA
    ③ 4PL Regression

    2. Methods

    3. Result

    4. Discussion

    5. Reference

    본문내용

    ◼ 실험 목적
    항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하는 ELISA방법 및 원리에 대해 이해하고,
    antibody농도에 따른 흡광도를 나타내는 4PL curve를 이용해 antibody가 antigen
    에 얼마나 강하게 붙었는지 알 수 있다.
    ◼ 이론
    ① 항원-항체반응
    항체(antibody) 또는 면역글로불린(immunoglobulin,Ig)은 항원(antigen)과 특이적 결합을 하여 항원-항체 반응을 일으키는 물질이다. 가장 대표적인 항체에는 면역글로불린G(Immunoglobulin G)가 있다. 이런 항체의 기본 구조는 Y자 모양이며, heavy chain 2개와 light chain 2개가 비공유결합과 이황결합으로 연결된 4개의 폴리펩타이드를 가지고 있다. IgG의 Y자 모양의 가지부분과 받침부분을 나누는 부분을 경첩이라고 하는데, 이 경첩영역을 기준으로 가지부분은 Fab, 받침부분은 Fc영역으로 나눈다. 항체는 세균이나 바이러스 같은 외부 항원과 단단하게 특이적으로 결합한다
    항원-항체반응은 면역 체계에서 세균이나 바이러스 같은 외부항원들과 특이적으로 결합해 항원을 인식하게하고 무력화시키기 위한 항원과 항체 사이의 특정한 화학 상호작용을 말한다. 항원-항체 결합의 특이성은 전하, 극성, 비극성, 수소결합 등이 다른 잔기들의 위치와 형태에 따라 항원과 항원결합자리 사이의 화학적 상보성을 부여 받아 얻게 된다. 항원과 항체의 결합은 유도적합(induced fit)에 의해 각각의 상보성 잔기들이 충분히 상호작용할 수 있도록 일어난다.

    ② ELISA
    – ELISA란?
    ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)는 antigen-antibody interaction을 이용해 antigen이나 antibody를 정성, 정량화할 수 있는 실험법이다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • Enzyme Activity- Colorimetric of Catalase

    목차

    I. Introduction
    1. Enzyme
    2. Catalase
    3. 흡광, 형광, 발광의 원리
    4. 표준 검정 곡선법 (standard calibration curve methods)
    5. 실험 원리 : 남은 h2o2양을 감별하여 catalase농도 인지 / 줌크로산염+아세트산 -> cromatic acid
    6. Dichromate/Acetic acid (D/A)

    II. Materials

    III. Method

    IV. Result

    V. Discussion
    1. 0.6unit과 0.8unit의 결과가 바뀐 듯한 양상을 보임
    2. sample 1, 2 끼리 유의미한 차이가 없음
    3. 시약 계산 원리
    4. 실험 중 주의 사항

    본문내용

    1. Enzyme

    효소(enzyme)란 생체 내의 화학반응을 매개하는 단백질 촉매이다. 효소와 결합하는 특이적 반응물을 기질(substrate)이라고 하고 기질과 반응하여 활성화 에너지를 낮춰 반응을 촉진 시킨다. 기질의 입체구조와 효소의 활성부위가 맞아야 결합하여 반응이 일어나고 이를 기질특이성을 가졌다고 한다. 효소는 결국 단백질이므로 3차구조에 중요한 온도, pH 등 환경 조선이 활성 정도에 영향을 미친다.

    촉매 작용에는 총 네가지 정도의 방법이 있는데 다음과 같다.
    1) 특이적 산-염기 촉매 작용 : 물속에 존재하는 H+또는 OH-이온만을 사용하는 촉매
    2) 일반적 산-염기 촉매 작용 : 다른 분자가 양성자 전이에 관여하여 작용
    3) 공유결합성 촉매 작용 : 효소와 기질 사이 일시적인 공유 결합이 형성
    4) 금속이온 촉매 작용 : 효소에 결합된 금속과 기질 간 이온의 상호작용을 일으킴

    2. Catalase

    카탈레이스는 O2 대사 동안 생성된 과산화수소에 의한 산화적 손상으로부터 세포를 보호하는 금속 효소이다. 과산화수소를 물과 산소로 분해함으로써 세포를 보호한다. 몸 속에 있는 H2O2는 체내에 있는 다른 금속 이온과 반응하여 hydroxyl radical을 만들 수 있다. hydroxyl radical은 반응성이 매우 커서 체내에서 순간적으로 반응할 수 있다. 이는 안정된 세포를 손상시킬 수 있기에 과산화수소를 체내에서 제거하는 것은 매우 중요하다고 볼 수 있다.

    3. 흡광, 형광, 발광의 원리
    1) 흡광(absorbance)

    흡광은 샘플에 의해 흡수된 빛의 세기를 측정하는 방법이다. 화학물질은 각각 고유의 값으로 잘 흡수하는 파장이 있다. 따라서 흡수된 빛의 세기를 측정한 다음 이를 통해 어떤 화합물이 많은지 측정할 수 있다.

    2) 형광(fluorescence)
    물질이 빛의 자극에 의하여 에너지 준위가 올라갔다가 다시 고유의 에너지 상태로 돌아가기 위해 빛을 발산하는 현상을 말한다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 면역학 ELISA 실험 레포트

    목차

    1.실험제목(title)
    2.실험날짜(date):
    3.실험목적(purpose):
    4.실험 준비물(material-reagent, instrument)
    5.실험 방법(method)
    6.실험 결과(result)
    7.실험 고찰(discussion)
    8.참고문헌(reference)

    본문내용

    · 실험 제목(title): ELISA assay(mouse macrophagy from bone marrow)

    · 실험날짜(date):

    · 실험목적(purpose): 항원-항체 특이적 결합반응과 효소를 이용한 발색반응을 통해 target을 정성, 정량적으로 분석하는 방법을 익히기 위함이다.

    · 실험 준비물(material-reagent, instrument)
    pipet, assay diluent, tip, L929 sup와 LPS를 모두 처리한 well의 상층액, PBST, working detector(Detection Antibody+SAv-HRP reagent), stop solution(H3PO4),

    · 실험 방법(method)
    ① coating과 blocking과정을 거친 well을 준비한다.

    출처 : 해피캠퍼스