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  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 05. Annexin V/PI/DAPI(Hoechst 33258) staining

    목차

    １.   서론
     
    ２.   실험 목적
     
    ３.   실험 방법
    가.    실험 재료(도구)
    1)      샘플
    2)      시약
    3)      장비
    나.    실험 방법
     
    ４.   실험 결과
     
    ５.   논의 (고찰)
     
    ６.   참고문헌

    본문내용

    세포사(Cell death)의 종류에는 외부 자극 등에 의해 갑자기 발생하는 세포 괴사(Necrosis), 사망 신호, 성장인자의 결핍 등의 의해 예정되어 세포가 죽어가는 세포자연사(Apoptosis)가 존재한다. 이 외에서도 세포 내부의 물질이 세포 스스로에 의해 제거되어 발생하는 자가포식(Autophagy) 등의 다양한 세포사가 존재한다. 이처럼 여러 존재하는 세포사들 중, 세포 괴사와 세포자연자를 Annexin V, PI, DAPI, Hoechst 33258 등의 다양한 염색법을 이용하여 세포 핵의 모양과 염색 여부의 관찰을 통해 세포 생존 여부, 죽음의 종류를 구별해보고자 한다.

    세포 괴사(Necrosis)는 외부의 강한 물리적인 힘, 화학 물질 등에 의한 심한 자극으로 인해 세포가 죽어가는 과정이며, 대표적인 예시로 화상과 동상 등이 있다. 현미경을 통해 세포 괴사가 일어나는 세포를 관찰해보면, 세포가 부풀어올라, 세포막과 세포 소기관들이 부풀어 올라 터지게 되며, 항체에 의한 염증반응이 일어난다. 세포 괴사가 일어나게 되면, 핵은 그렇지 않은 세포에 비해 크기가 커지며, 핵막의 구분이 불명확해지고, 염색질이 부분적으로 응축되는 현상이 발생한다.

    세포자연사(Apoptosis)는 괴사와는 다르게, 일련의 세포 변화에 의해 일반적으로 진행되는 능동적인 과정으로, 생리학적으로 세포 증식과 세포 발달이 일어나는 중에 조직에서 일정한 세포를 유지하기 위한 반응이고, 성숙한 조직의 우지나 배아 발달 등에서 중요한 역할을 수행하는, 신체 내에서 매우 주요한 과정이다. 세포 자연사는 사망 신호, 성장인자의 결핍, 발생 과정의 프로그램 등의 다양한 원인으로 야기되며, 이 때, 세포의 죽음을 실행시키는 캐스페이즈(caspase) 유전자군과 캐스페이즈의 활동을 조절 해주는 Bcl-2 집단 유전자군에 의해 조절된다. 세포자연사가 진행 중인 세포를 현미경을 통해 관찰해보면, DNA의 분절화와 염색질의 응축이 일어나고, 핵의 분절화가 일어나며, 결과적으로 세포의 분절화가 일어나 세포사멸체를 형성하는 모습을 관찰할 수 있다. 이때 형성된 세포사멸체는 식세포의 식균작용을 통해 소멸된다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • actin filament 관찰 A+ report

    목차

    1. Introduction
    2. Materials & Methods
    3. Result
    4. Discussion
    5. References

    본문내용

    -Objective
     FITC-conjugated phalloidin 사용하여 actin filament를 시각화하고, 세포의 모양과 구조를 관찰한다.
     형광 염색의 원리와 실험방법을 숙지하고, 형광현미경의 원리를 이해한다.

    -Principle 및 Theory
    가. 세포 내 actin filament의 기능과 배열 구조에 대해 서술하시오.
    Actin filament(미세섬유)는 세포 내 가장 풍부한 단백질 중 하나로, 원형질막 아래에서 지지 기능을 하고 세포 모양을 결정하며 세포의 이동을 도와준다.
    Actin filmament의 구조에 대해서 설명하자면, 세포 내에서 G-actin, F-actin 두 형태의 액틴으로 구성된다. G-actin은 구형 액틴(globular actin)으로 미세섬유의 기본단위이자 단량체이다. F-actin은 섬유성 액틴(filamentous actin)으로 actin protein이 중합하여 형성된 선형 filament로, 두 가닥의 G-actin 단위체가 꼬여서 이중 나선을 형성한다. 미세섬유는 양성과 음성말단이 있는데, (+)말단이 (-)말단보다 합성 및 분해속도가 빠르다. G-actin에 ATP가 붙어있을 때 결합력이 높은 상태가 된다. G-actin의 농도가 높으면 미세섬유 말단에 붙어있는 G-actin의 ATP가 가수분해되기 전에 다른 G-actin이 와서 붙으므로 ATP가 분해되지 못하고, 동적 평형이 될 때까지 미세섬유가 신장된다. 그러므로 G-actin의 농도가 높을수록, ATP가 많을수록 미세섬유는 신장된다.
    Actin filament의 기능은 여러 가지가 있다.
    ① 미세섬유와 여러 단백질들이 교차결합을 형성해서 탄력 있는 세포막 근처의 구조를 만든다.
    ② 소장 상피세포의 미세융모를 지지: 표면적을 넓혀 물질이 잘 흡수되도록 세포막을 융기시켜 미세융모를 형성한다.
    ③ 근육운동: 미세섬유의 운동단백질인 ‘미오신’은 ATP를 쓰면서 미세섬유를 활주시켜 근수축이 일어나게 한다. 미오신의 머리에는 ATPase활성이 있어 ATP를 가수분해시키며 근육운동이 일어날 수 있다.

    출처 : 해피캠퍼스