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  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 09. TUNEL staining

    목차

    １.   서론
     
    ２.   실험 목적
     
    ３.   실험 방법
    가.    실험 재료(도구)
    1)      샘플
    2)      시약
    3)      장비
    나.    실험 방법
     
    ４.   실험 결과
     
    ５.   논의 (고찰)
     
    ６.   참고문헌

    본문내용

    면역 염색법(Immunostaining)은 세포 또는 조직에서 특정 분자, 단백질 등을 항체를 이용해 가시화하는 방법으로, 특정 단백질에 선택적으로 결합하는 항체를 세포나 조직에 반응시킨 후, 항체의 결합 반응 후 그 항체의 위치를 관찰하는 생화학적인 방법이다. 면역염색법의 종류로는 면역 조직 화학 염색법 (immunohistochemistry, IHC), 면역 세포 화학 염색법 (immunocytochemistry, ICC), 면역 형광법 (immunofluorescence, IF) 등이 존재한다.
    면역 조직 화학 염색법 (IHC)은 특정 타겟 단백질이 고정된 조직 내에서 발현하는지, 발현한다면 어디 위치에서 발현하는지에 대해 조직에 있는 특정 항원에 결합하는 특정 항체를 이용하여 염색하는 방법이다. IHC는 이차항체 염색 이후 발색제인 DAB 등 을 이용하여 발색하는 방법으로 보통 peroxidase에 의해 산화되어 갈색으로 발색된다. 최근에는 갈색으로 반응하는 DAB 반응 말고도 다양한 종류의 kit들이 개발되고 있다.
    면역 세포 화학 염색법 (ICC)은 IHC와 거의 유사하지만, IHC가 조직을 염색하여 관찰한다는 점과는 달리, 세포를 염색하여 관찰하는 면역염색법이다.
    면역 형광법 (IF)은 조직 항체의 일차 항체를 결합시키고, 형광 탐침이 부착된 2차 항체를 1차 항체와 선택적으로 결합시키는 방법으로, 형광 현미경을 통해 관찰한 시료 내에서 여러 개의 항원을 각각 가시화 할 수 있다는 장점을 지닌 실험법이다. 면역 형광법을 통해서, 조직에서의 특정 단백질의 발현위치, 발현 정도를 확인할 수 있다. IF는 IHC와 거의 유사한 프로토콜을 지니고 있는데, 차이점으로는 IHC와 달리 이차 항체로 형광이 달린 항체를 사용하며, H2O2 incubation 과정이 필요하지 않는다는 점이 존재한다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • [만점보고서]세포 염색-Actin filament 관찰

    목차

    1. Objective
    2. Introduction
    3. Materials
    4. Method
    5. Result
    6. Discussion
    7. References

    본문내용

    1. Objective
    FITC-conjugated Phalloidin을 사용해서 actin filament를 시각화한 후 세포의 모양과 구조를 관찰하는 것이 목적이다. 또한 그 과정에서 형광 염색의 원리와 실험 방법을 배우고, 형광 현미경의 원리를 이해한다.
    2. Introduction
    (1) 세포 내 Actin filament의 기능과 배열 구조
    F-actin이란 microfilament의 한 종류이며, 구형의 monomer인 G-actin이 기본 단위이고 G-actin이 머리-꼬리 상호작용을 통해 강하게 결합하여 polymerization 되어 형성된 긴 가닥의 선 모양의 중합체가 F-actin이다. 2개의 F-actin은 개별 G-actin이 166 °회전함으로써 이중 나선(helix) 구조로 배열되어 액틴 가닥을 형성하고, 이 가닥에 조절 단백질들이 결합하여 actin filament가 형성된다. 모든 G-actin은 동일한 방향으로 배열되기에 독특한 극성을 갖게 되고, 양 끝 말단을 양극(hinge)과 음극(ATP 결합부위)으로 서로 구분할 수 있게 된다. F-actin은 섬유상 구조물로 조립되어 세포 골격의 주요 구성성분이 된다.
    F-actin 혹은 actin filament는 세포 내 원형질막 바로 하부에 존재하며 세포의 형태를 유지하거나, 형태를 변화시키거나, 세포 내의 물질 이동을 담당하는 등 기계적 지지 역할을 하는 세포골격을 구성한다. 또한 세포 표면의 이동에 관여하여 세포의 움직임을 조절하거나, 조직 재생이나 세포 분열에도 관여할 수 있다.

    출처 : 해피캠퍼스