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  • Plasmid purification & DNA 정량 A+ report

    목차

    1. Introduction
    2. Methods (mini-prep)
    3. Result & Discussion
    4. References

    본문내용

    -Objective
    Transformation 과정을 통해 Bacterial cell 안에서 Insert DNA와 Vector가 ligation 된 후, 증식된 plasmid DNA만을 세포에서 추출하기 위해, 그리고 잘 추출하였는지 DNA 농도 및 순도를 보기 위해 Plasmid purification 및 DNA 정량 실험을 진행하고자 한다.

    -Principle 및 Theory (Background)
    가. Plasmid DNA transformation 이란?
    우선, plasmid DNA는 세포 내 핵 이외의 세포질 속에 있으며(세균 유전체와 독립적으로 존재) 자율적으로 증식하고 스스로 복제 가능한 성질을 가진, 자손에게 유전되는 DNA이다. 생장에 필수적이지 않지만 세균에 이점을 제공하는 유전자들이 존재한다. Origin of replication을 가지는 circular한 extrachromosomal DNA로, 접합전달, 항생물질에 대한 저항성, 항(anti)물질의 합성 등의 기능을 가지고 있어 특정 유전자 DNA를 삽입하여 cloning vector로 이용된다. 또한, plasmid DNA에는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자가 위치해서 항생제를 첨가한 배지에서 선택적으로 선별 가능하다는 특징을 가진다.

    Plasmid DNA transformation이란 특정 종의 세포에 외부 유전자를 도입하여 그 세포가 새로운 유전자 정보를 표현하도록 하는 과정이다. 간단히 말해, ligation된 plasmid를 숙주세포 안으로 넣어주는 것이다. 일반적으로, plasmid는 작은 원형 DNA 조각으로서 bacteria와 같은 원핵생물의 세포외부에서도 독립적으로 복제할 수 있는 DNA이다. 특정 유전자 조각을 plasmid에 삽입한 후, host cell에 도입해서 해당 유전자가 host cell의 유전자로 통합되어 새로운 특성을 나타나게 만든다. 이 과정에서 일반적으로 열 충격(heat shock; 화학적 방법)이나 전기 충격(electroporation)을 이용하여 처리한다. 변형된 세포는 새로운 유전자를 표현하며, 특정 세포기능을 연구하거나 유전자 치료 등의 목적으로 사용될 수 있다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 6. Genomic DNA prep & Gel Electrophoresis

    목차

    1. 실험 일시 및 장소
    2. 실험 도구
    3. 이론
    4. 실험 목표
    5. 실험 방법
    6. 결과
    7. 고찰
    8. 출처

    본문내용

    2. 실험 도구
    – Sample : mouse tail
    – 실험 기자재 : 마이크로 피펫 & 마이크로 피펫 팁, EP tube , tube rack, 라텍스 장갑, nanodrop, UV lamp, 전기영동장치, shaking incubator, centrifuge
    – 시약 : lysis buffer(1M Tris HCl, 0.5M EDTA, 010% SDS, 5M NaCl), proteinase K, isopropanol, agarose powder, 1X TAE buffer, 70% DEPC-EtOH, DNA size marker, DW, 6X loading dye, gel electrophoresis buffer, EtBr

    3. 이론
    ① Genomic DNA
    Genomic DNA는 긴 이중사슬로서 세포 핵 내에 존재한다. 게놈 DNA 또는 gDNA는 유기체의 염색체 DNA로 유전 물질의 대부분을 나타낸다. 세포가 본래 가지고 있는 DNA로, 외부에서 들어온 plasmic DNA같은 extra genomic DNA가 아닌 chromosome DNA이다. 세포가 살아가는데 필요한 모든 유전정보들을 담고 있는 DNA이다. 진핵세포 생물의 경우, 핵 내에 존재하는 chromosome DNA 뿐만 아니라, 미토콘드리아나 엽록체 genomic DNA를 모두 포함하기 때문에 진핵세포가 가지고 있는 total genomic DNA를 의미하기도 한다.
    ② DNA 추출
    Genomic DNA와 plasmic DNA 추출의 기본 원리는 같으나, plasmid DNA는 genomic DNA로부터 plasmid를 분리하기 위한 단계를 거쳐야 한다. 세포로부터 DNA 추출은 크게 세포의 수확(cell harvest), 세포의 파괴(cell lysis), DNA 추출과 정제(DNA purification)의 과정으로 나뉜다.
    1) 세포의 수확 : 일반적으로 원심분리를 이용하여 세포를 수확한다.
    2) 세포의 파괴
    세포로부터 DNA를 분리하기 위해서는 세포 내 DNA가 세포 밖으로 유출될 수 있도록 세포벽, 세포막을 분해해야한다. 이는 물리적, 화학적 방법으로 나뉜다.

    출처 : 해피캠퍼스