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  • Plasmid DNA의 분리 및 정제방법

    목차

    ① Alkaline lysis miniprep
    ② Boiling miniprep
    ③ Lithium miniprep  

    본문내용

    플라스미드를 정제는 total cell DNA를 일반적인 분리방법과 같다. 플라스미드를 지니는 세포를 액체배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 하면된다. extract는 단백질을 제거하고 에탄올침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다. 그러나 totall cell DNA 분리와 plasmid 정제와는 중요한 차이점이 있다. 플라스미드 분리는 일반적으로 많은 양의 chromosomal DNA 로부터 분리하여야 한다. 플라스미드 분리방법은 플라스미드 DNA와 bacterial DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리된다. 가장 큰 플라스미드의 길이는 E. coli 의 염색체 길이에 8%밖에 되지 않으며 대부분이 작다.
    플라스미드와 bacteria DNA의 구조에 차이로부터 분리하는 방법이 있다. 플라스미드와 염색체는 구형인데 염색체는 extract 시 구형에서 선형조각으로 깨어지며 플라스미드에는 구형으로써 변화가 없다. 이 구조적인 차이점을 이용하여 정제된 플라스미드를 얻을 수 있다.   
    Minipreps of plasmid DNA
    bacterial cells로부터 plasmid DNA를 소량으로 분리하는 방법은 대단히 많지만 성공률과 속도를 생각하여 세가지 방법으로 소개하면 Alkaline lysis prep, boiling method 그리고 lithium-based procedure 이다.
    ① Alkaline lysis miniprep
    alkaline lysis procedure(Bimboim, Doly, 1979)은 가장 일반적으로 쓰이는 분리방법이다. Plasmid DNA는 plasmid을 지니고 있는 bacteria에서 적은 양의 배양으로 분리될수 있다. Bacteria는 sodium dodecyle sulfate(SDS), NaOH를 함유하는 용액으로 처리하여 용균되어 진다(여기서 SDS는 bacterial proteins을 변성시키며 NaOH는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 변성시킨다).

    출처 : 해피캠퍼스

  • 생명과학실험 plasmid DNA 추출 예비 레포트

    목차

    1. 서론
    2. 실험 재료 및 방법
    3. 참고 문헌

    본문내용

    1. 서론
    1) 실험 목적: 독자적으로 증식이 가능한 DNA 분자 plasmid(플라스미드)의 DNA 분리 방법을 이해하고, 이를 이용하여 순수한 plasmid DNA를 추출해 본다.
    2) 배경 지식
    (1) plasmid(플라스미드): 세균의 염색체 이외의 독자적으로 증식할 수 있는 DNA 분자로, 세포에서 분리한 plasmid는 가장 압축된 형태인 초나선형으로 존재한다. plasmid는 염색체와는 독립하여 복제되어 증식할 수 있으나, 복제 과정에 필요한 효소들은 숙주 염색체에 의존한다. plasmid는 하나 이상의 유전자를 암호화하고 있으며, 숙주의 생장에서 필수적인 유전자를 가지지는 않지만, 특정 환경에 생존하기 위해서 중요한 기능을 수행한다. 이러한 plasmid는 유전자 클로닝과 유전자 전달, 외래 유전자/재조합 유전자 발현, 유용 단백질 생산 등으로 다양하게 활용이 가능하며, 유전자공학 분야에서 광범위하게 응용되고 있다.

    출처 : 해피캠퍼스