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  • 식물분자생물학실험 Real-time PCR (Quantitative RT-PCR) 결과보고서

    목차

    1. 실험제목
    2. 실험일자
    3. 실험개요
    4. 실험이론
    5. Materials and methods
    6. 실험결과
    7. Discussion
    8. References

    본문내용

    Central Dogma에서 DNA는 RNA로 transcription되고 RNA는 protein으로 translation되는 데, 일부 생명체에서 RNA의 sequence는 RNA를 template 삼는 reverse transcriptase에 의해 transcription 과정을 역으로 진행할 수 있다. 이를 응용하여 RNA template에 reverse transcriptase를 부착시켜 template에 상보적인 DNA가 생성되게 할 수 있다. 이 것이 cDNA synthesis이다. 해당 process 이후에 일반적인 PCR Protocol을 그대로 진행하 여 다량의 cDNA를 생성할 수 있는데 이것이 바로 RT-PCR로 불리는 reverse transcriptase PCR이다.(1)
    cDNA synthesis는 다양한 application에 활용될 수 있으며 research 대상 생명체가 RNA 를 genetic molecule로 활용하는 경우나 RNA sample의 sequence를 알고 싶을 때 이를 template DNA로 변환하여 polymerase chain reaction을 진행할 수 있도록 하기 위해 활 용되는 경우가 대표적이다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 06. RNA 추출, cDNA 합성 및 qRT-PCR

    목차

    １.   서론
     
    ２.   실험 목적
     
    ３.   실험 방법
    가.    실험 재료(도구)
    1)      샘플
    2)      시약
    3)      장비
    나.    실험 방법
     
    ４.   실험 결과
     
    ５.   논의 (고찰)
     
    ６.   참고문헌

    본문내용

    PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)은 DNA의 상보적 가닥에 결합하는 2개의 프라이머를 동시에 사용하여 증폭을 원하는 DNA의 특정 영역만을 in vitro에서 복제, 증폭하는 기술이다. 1983년에 멀리스가 고안한 PCR은 3단계를 거쳐 DNA를 복제하는데, 차례로 변성, 결합, 신장이다. 첫번째로, 주형 DNA를 94℃에서 변성시켜, 두 가닥을 한 가닥으로 분리한 뒤, 두번째는 50℃ ~ 65℃로 낮추어 프라이머와 풀린 DNA의 두 가닥 사이에 상보적으로 결합하게 한다. 마지막으로 다시 온도를 TAP 중합 효소의 적정 온도인 72℃로 높여 중합 반응을 시키는 1번의 사이클을 25~50 사이클 정도 반복하여 2의 n승으로 DNA의 양을 증폭시킨다. 이후, 연구를 통해 PCR 원리를 이용한 RT-PCR, qRT-PCR 등의 실험 방법이 사용되고 있다.

    RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction, 역전사효소 중합효소 연쇄반응) 은 유전자에서 만들어진 RNA에서 역전사효소를 이용하여 cDNA를 생성한 후, cDNA를 주형 가닥으로 PCR을 수행하여, 유전자의 RNA 발현 정도를 측정하는 방법이다. RT-PCR에서는 측정을 원하는 RNA를 역전사효소를 이용하여 cDNA를 합성해야 하는데, 이때 역전사 반응 시작을 위해선 RNA 3’말단에 결합하는 프라이머가 필요하다. 이후 생선된 cDNA을 주형으로 3’말단에 결합하는 프라이머를 이용하여 PCR을 수행하면, 이중가닥의 DNA가 만들어지고, 이후 과정은 위에 설명한 PCR의 과정과 동일하다. RT-PCR은 mRNA를 이용하여 생성한 cDNA를 증폭하여 PCR을 수행하기에, 세포나 조직 등에 극소량으로 존재하는 mRNA를 검출할 수 있다는 장점이 있는 방법이다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 유전발생생물학실험_RT-reaction, qRT-PCR.hwp

    목차

    Ⅰ. 서론
    Ⅱ. 재료 및 방법
    Ⅲ. 결과
    Ⅳ. 논의
    Ⅴ. 참고문헌

    본문내용

    Reverse transcription이란 RNA를 주형으로 해서 cDNA로서 RNA의 염기순서를 전사하는 반응이다. 이는 레트로바이러스를 생육하기 위해서는 DNA합성이 무조건 필요하다는 연구를 시작으로, 역전사효소를 발견하며 증명되었다. Reverse transcription은 central dogma에서 RNA에서 DNA로 가는것도 있다는 것을 발견한 것이 중요하다. 여기에는 Random hexamer, dNTPs, RNase inhibitor, Reverse transcriptase가 필요한데, Reverse transcriptase는 레트로 바이러스인 마우스백혈병 바이러스와 라우스육종 바이러스에서에서 발견되어 RNA에서 DNA로 전사하거나 역방향으로 전사하는 효소이다(강영희 외 편저. 2008).
    Polymerase Chain Reaction은 PCR로 줄여쓸 수 있으며, 매우 적은 양의 유전자를 primer를 사용해 많은 양으로 증폭시키는 유전자증폭 기술이다. 이 기술은 적은 양의 유전자를 원하는 양만큼 증폭시키거나 염색체의 특정 영역을 증폭시킬 수 있다. DNA 한분자의 반복적인 복제를 통해 지수적으로 DNA 분자의 수를 늘릴 수 있는 것이다. PCR은 DNA 중합효소와 짧은 한쌍의 oligonucleotide를 사용하는데, oligonucleotide는 증폭이 될 DNA 서열과 상보적인 염기서열을 가지기 때문에 primer로서 사용이 된다(강영희 외 편저. 2008), (양재섭 외 2인 옮김).
    PCR에서 필요한 것은 증폭하려는 template DNA와 DNA의 특정한 염기서열에 부착되는 DNA 절편인 primer 한 쌍, dNTP, polymerase이다.

    출처 : 해피캠퍼스