목차
Ⅰ. Title
Ⅱ. Abstract
Ⅲ. Introduction
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Materials&Methods
Ⅶ. References
본문내용
Ⅰ. Title
cell culture, Genomic DNA Isolation
Ⅱ. Abstract
세포에 대한 연구는 모든 생명과학 분야 및 여러 응용과학의 기초가 된다. 여러 실험에 사용하기 위해서는 세포의 인공적인 배양이 필수적이다. 최근에는 HEK 293T cell line이 mammalian cell을 사용한 연구에 자주 사용된다. 이는 성장 및 유지환경 등에서의 관리가 쉬워 세포의 배양이 용이하다고 하는데, HEK293T cell cultrue을 진행해 세포의 완전한 성장이 언제쯤인지, 세포의 모양은 어떤지 관찰하고자 하였다. 모든 세포는 유전물질로 DNA를 가지는데, DNA의 종류 중 genomic DNA는 생물이 생명을 유지하는데 필요한 단백질들을 만드는 유전정보가 있으므로 생체 내에서 중요한 역할을 한다. 또한, DNA와 함께 RNA도 유전정보를 포함하는 핵산인데, 이는 단백질 합성에서 주형 역할을 하는 mRNA와 펩타이드 결합의 생성을 촉진하는 tRNA, 번역단계에서 촉매작용을 하는 rRNA 등 여러 종류가 존재한다. 따라서, genomic DNA와 mRNA, tRNA, rRNA등을 모두 포함한 total RNA를 HEK293T cell에서 추출하여 전기영동을 통해 이들의 존재 여부 및 크기 등을 관찰하고자 한다.
세포의 배양에는 DMEM 배지와 FBS를 사용하였으며, Trypsin-EDTA로 바닥의 cell을 떼어낸 뒤 원심분리로 cell pellet만을 남겨주었다. 이후 DMEM배지를 cell pellet에 넣어 페트리디쉬에 옮겨 37도씨에서 배양하였다. genomic DNA의 추출은 cell을 원심분리를 통해 모은 뒤 lysis의 과정을 거쳐 세포를 용해시킨 후, 단백질을Genomic DNA extraction buffer과 Proteinase K로 변성 및 분해시켰다. RNA는 RNase로 제거하였다. 단백질과 RNA 제거에 쓰인 용액들을 sodum acetate, phenol,chloroform, 알코올 건조를 통해 제거하고 genomic DNA만 추출하였다. 이후 전기영동해 DNA band를 확인하였다. total RNA의 추출은 cell을 원심분리를 통해 모은 뒤 TRIzol(TRI Reagent)로 cell을 용해시켰다. 이후 chloroform을 넣고 원심분리한 후 생긴 3개의 층 중 aquaphase에서 RNA를 추출해 전기영동해 band를 확인하였다.
출처 : 해피캠퍼스