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[태그:] Transformation

  • Plasmid purification & DNA 정량 A+ report

    목차

    1. Introduction
    2. Methods (mini-prep)
    3. Result & Discussion
    4. References

    본문내용

    -Objective
    Transformation 과정을 통해 Bacterial cell 안에서 Insert DNA와 Vector가 ligation 된 후, 증식된 plasmid DNA만을 세포에서 추출하기 위해, 그리고 잘 추출하였는지 DNA 농도 및 순도를 보기 위해 Plasmid purification 및 DNA 정량 실험을 진행하고자 한다.

    -Principle 및 Theory (Background)
    가. Plasmid DNA transformation 이란?
    우선, plasmid DNA는 세포 내 핵 이외의 세포질 속에 있으며(세균 유전체와 독립적으로 존재) 자율적으로 증식하고 스스로 복제 가능한 성질을 가진, 자손에게 유전되는 DNA이다. 생장에 필수적이지 않지만 세균에 이점을 제공하는 유전자들이 존재한다. Origin of replication을 가지는 circular한 extrachromosomal DNA로, 접합전달, 항생물질에 대한 저항성, 항(anti)물질의 합성 등의 기능을 가지고 있어 특정 유전자 DNA를 삽입하여 cloning vector로 이용된다. 또한, plasmid DNA에는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자가 위치해서 항생제를 첨가한 배지에서 선택적으로 선별 가능하다는 특징을 가진다.

    Plasmid DNA transformation이란 특정 종의 세포에 외부 유전자를 도입하여 그 세포가 새로운 유전자 정보를 표현하도록 하는 과정이다. 간단히 말해, ligation된 plasmid를 숙주세포 안으로 넣어주는 것이다. 일반적으로, plasmid는 작은 원형 DNA 조각으로서 bacteria와 같은 원핵생물의 세포외부에서도 독립적으로 복제할 수 있는 DNA이다. 특정 유전자 조각을 plasmid에 삽입한 후, host cell에 도입해서 해당 유전자가 host cell의 유전자로 통합되어 새로운 특성을 나타나게 만든다. 이 과정에서 일반적으로 열 충격(heat shock; 화학적 방법)이나 전기 충격(electroporation)을 이용하여 처리한다. 변형된 세포는 새로운 유전자를 표현하며, 특정 세포기능을 연구하거나 유전자 치료 등의 목적으로 사용될 수 있다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • E.coli_transformation_형질전환 실험보고서

    목차

    1. Transformation의 원리
    (1) 형질전환의 시작
    (2) 형질전환의 메커니즘
    (3) E.coli의 형질 전환(transformation)

    2. 실험재료

    3. 실험방법
    (1) competent cell 제조
    (2) transformation 방법

    4. 실험결과

    5. 실험고찰

    6. 참고문헌

    본문내용

    형질전환은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적인 성질이 변하는 일을 말한다. 형질전환은 1928년 영국의 F.그리피스가 폐렴쌍구균(肺炎雙球菌)을 이용하여 실시한 실험이 계기가 되어 발견되었다. 다당류로 이루어진 두꺼운 막, 즉 협막(莢膜)을 가진 S형균으로부터 DNA를 추출하여 이것을 다당류성 협막을 가지지 않은 R형균에 작용시키면 R형균의 일부가 S형균으로 변한다. 이것은 S형 세균의 DAN가 R형 세균 속에 들어가서 유전자 발현을 하기 때문이다. 전환을 일으키는 데 필요한 DNA의 최소량은 약 10만분의 1 mol이며, DNA의 single strand를 주는 것보다도 double strand를 주는 쪽이 전환을 일으키기 쉽다. 형질전환 실험에 의하여 유전자의 본체가 DNA라는 것이 밝혀졌다. 그러나 고등생물에 있어서도 세균류에서 볼 수 있는 것 같은 형질전환이 일어나는지 어떤지는 아직 밝혀지지 않았다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 미생물학 transformation 형질전환 실험 레포트

    목차

    1.실험제목(title)
    2.실험날짜(date):
    3.실험목적(purpose):
    4.실험 준비물(material-reagent, instrument)
    5.실험 방법(method)
    6.실험 결과(result)
    7.실험 고찰(discussion): 실험에 대한 고찰도 추가하기
    8.참고문헌(reference)

    본문내용

    실험제목(title): Transformation
    · 실험날짜(date):
    · 실험목적(purpose): plasmid DNA를 competent cell에 도입하여 colony를 관찰함으로써 transformation과정을 이해한다.
    · 실험 준비물(material-reagent, instrument)
    피펫, LB agar 배지, spreader, DH5 alpha, 항온수조, 얼음수조, e-tube, dilution한 DNA

    · 실험 방법(method)
    ① DH5 alpha를 얼음이 담긴 수조에 두고, e-tube를 얼음에 두어 차갑게 유지한다.
    ② 20μl의 DH5 alpha를 e-tube에 넣는다.
    ③ DNA 2μl을 DH5 alpha에 넣는다. (최대한 competent cell이 충격을 받지 않도록 주의한다.)
    ④ 얼음에서 30분간 incubation한다.
    ⑤ 42℃에서 90sec간 incubation한다.
    ⑥ 얼음에서 5분간 incubation한다.
    ⑦ 37℃에서 데운 항생제가 들어있는 LB agar 배지에 competent cell 20μl을 넣고 spreading한다.
    (control group)
    ⑧ 37℃에서 데운 항생제가 들어있는 LB agar 배지에 transformation한 dna를 20μl 넣고 spreading한다.
    ⑨ 37℃에서 overnight으로 배양한다.

    · 실험 결과(result)

    · 실험 고찰(discussion): 실험에 대한 고찰도 추가하기
    competent cell은 온도와 충격에 민감하므로 실험 시 주의해서 다뤄야한다. 또한 배지에 spreading시 배지가 파이지 않도록 조심해서 다뤄야 한다.

    출처 : 해피캠퍼스