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[태그:] Western blot

  • Protein electro-transfer and Western blot 실험보고서

    목차

    1. Introduction
    2. Method
    3. Result
    4. Discussion

    본문내용

    I. Introduction
    Western blot 은 찾고자 하는 protein 의 antigen epitope 와 반응하는 antibody 를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)을 찾아내는 방법이다. 전기 영동을 이용하여 단백질을 gel 상에서 크기에 따라 분리한 후, membrane 에 transfer 한다. Membrane 에 발광하는 probe 가 붙어 있는 antibody 를 붙여주는 항원-항체 반응을 이용하여 찾고자 하는 특정 단백질을 검출한다. 여러 가지 단백질 중에서 원하는 단백질만을 보는 방법으로는 colorimetric, fluorescence, luminescence 등이 있다.

    II. Material
    8x Acrylamide gel, 5x Sample Buffer, 1x SDS running Buffer, 1x Transfer Buffer, Nitro cellulous membrane, 3M Paper, Transfer cassette, Gel Releaser, Protein marker, Blocking solution (5% skim milk), AP (Alkaline Phosphatase) Primary Antibody, HRP-conjugated Secondary Antibody, ECL Solution, 0.05% TBST, Tray, Vortex Mixer, tube, pipette, Disposable glove, Gel cassette stand, tank, DW, ep-tube, centrifuge, rocker

    III. Method
    1. 단백질 sample 을 준비한다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 분자생물생화학실험_IPTG, 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험

    목차

    Ⅰ. Introduction
    Ⅱ. Materials & Methods
    Ⅲ. Result
    Ⅳ. Conclusion(Discussion)
    Ⅴ. Reference

    본문내용


    IPTG란, Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside의 약기로 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다[1].

    Tank buffer
    전기영동장치에 채우는 Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-base)이온이 들어간다. Glycine은 아미노산의 성질로 인해 음전하를 띠거나 net charge가 0인 쌍극성 이온 형태로 존재한다. gel에 형성된 well에 단백질 시료를 가하고 전기영동을 시작하면 Cl-이온과 단백질, Glycine 이온이 모두 (+)극을 향해 출발한다. 그런데 glycine은 stacking gel의 낮은 pH에서 다시 평형을 이루어 일부가 쌍극성 이온이 되어버리기 때문에 이 부분에서 움직이는 이온이 없어지고, 결과적으로 전류가 감소한다. 그러나, 전체 gel의 전류는 유지되어야 하므로 이를 극복하기 위해서 Cl-이온과 glycine 사이에 매우 높은 전압차가 형성된다. 따라서, 상대적인 이동속도는 glycine<단백질출처 : 해피캠퍼스