[충남대] 분자생물생화학실험 – 대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험

목차

I. 서론
II. 재료 및 방법
III. 결과
IV. 논의
V. 참고문헌

본문내용

대장균에서 도입 유전자 발현을 위해 쓰이는 프로모터는 주로 조절성이다. lac 프 로모터는 대장균의 젖당 오페론에서 쓰이는 프로모터로서 lac repressor가 있을 때 발현이 없다가 젖당 또는 젖당의 유사체( IPTG 등)가 있을 때 억제자가 프로모터에 결합하지 못하므로 유전자 발현이 일어난다. 이 lac 프로모터를 발현하고자 하는 표적유전자와 함께 삽입하면 이 유전자는 젖당 의존적 발현을 하게 된다. T7 발현 시스템은 lac 프로모터와 T7 프로모터를 복합적으로 사용하는 것으로 다른 프로모 터와 달리 촉진성 발현 조절 양식을 채택하고 있다. T7 발현 시스템으로 단백질을 발현하려면 T7 프로모터를 지닌 발현 벡터와 DE3 유전자가 삽입된 대장균 균주를 사용해야 한다. DE3란 lac 프로모터에 의해 조절되는 T7 RNA 중합효소 유전자이 다. T7 프로모터가 든 발현 벡터에 표적유전자를 재조합하여 적절한 대장균 균주 에 도입하여 선별한다. 이후 이 대장균을 IPTG로 처리하면 T7 중합효소의 발현이 일어난다. 이후 이 중합효소는 T7 프로모터에 결합하여 표적유전자 발현을 시작한 다[1].

출처 : 해피캠퍼스