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[태그:] Phalloidin

  • actin filament 관찰 A+ report

    목차

    1. Introduction
    2. Materials & Methods
    3. Result
    4. Discussion
    5. References

    본문내용

    -Objective
     FITC-conjugated phalloidin 사용하여 actin filament를 시각화하고, 세포의 모양과 구조를 관찰한다.
     형광 염색의 원리와 실험방법을 숙지하고, 형광현미경의 원리를 이해한다.

    -Principle 및 Theory
    가. 세포 내 actin filament의 기능과 배열 구조에 대해 서술하시오.
    Actin filament(미세섬유)는 세포 내 가장 풍부한 단백질 중 하나로, 원형질막 아래에서 지지 기능을 하고 세포 모양을 결정하며 세포의 이동을 도와준다.
    Actin filmament의 구조에 대해서 설명하자면, 세포 내에서 G-actin, F-actin 두 형태의 액틴으로 구성된다. G-actin은 구형 액틴(globular actin)으로 미세섬유의 기본단위이자 단량체이다. F-actin은 섬유성 액틴(filamentous actin)으로 actin protein이 중합하여 형성된 선형 filament로, 두 가닥의 G-actin 단위체가 꼬여서 이중 나선을 형성한다. 미세섬유는 양성과 음성말단이 있는데, (+)말단이 (-)말단보다 합성 및 분해속도가 빠르다. G-actin에 ATP가 붙어있을 때 결합력이 높은 상태가 된다. G-actin의 농도가 높으면 미세섬유 말단에 붙어있는 G-actin의 ATP가 가수분해되기 전에 다른 G-actin이 와서 붙으므로 ATP가 분해되지 못하고, 동적 평형이 될 때까지 미세섬유가 신장된다. 그러므로 G-actin의 농도가 높을수록, ATP가 많을수록 미세섬유는 신장된다.
    Actin filament의 기능은 여러 가지가 있다.
    ① 미세섬유와 여러 단백질들이 교차결합을 형성해서 탄력 있는 세포막 근처의 구조를 만든다.
    ② 소장 상피세포의 미세융모를 지지: 표면적을 넓혀 물질이 잘 흡수되도록 세포막을 융기시켜 미세융모를 형성한다.
    ③ 근육운동: 미세섬유의 운동단백질인 ‘미오신’은 ATP를 쓰면서 미세섬유를 활주시켜 근수축이 일어나게 한다. 미오신의 머리에는 ATPase활성이 있어 ATP를 가수분해시키며 근육운동이 일어날 수 있다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 면역시냅스 형성 및 관찰 A+ report

    목차

    1. Introduction
    2. Materials and Methods
    3. Result & Discussion
    4. References

    본문내용

    -Objective
    면역 시냅스 형성 과정을 이해하고 이를 관찰한다.
    부연설명) naïve-T cell과 APC의 만남 뿐 아니라 self-antigen 또는 nonself-antigen을 표지한 thymus의면역 시냅상피세포와 naïve-T cell 사이에 형성되어지는 면역 시냅스는 우리 몸의 면연관용, thymocyte 발달 및 면역조절에 관여한다. 그리고 effector T cell과 표적세포 사이에 형성되는 면역 시냅스는 표적세포의 치사에 관여하고, effector T cell과 macrophage 사이에 형성되는 면역 시냅스는 cytokine 분비를 통해 macrophage activation에 관여한다. 그 외, T cell과 B cell 사이의 면역시냅스는 체액성 면역반응을 매개한다. 이렇게 면역 시냅스의 조절은 외부 침입자에 대한 인체의 면역 활성이나 자가-항원에 대한 면역관용에 깊게 관여하므로 면역학 연구에 핵심적이자 기본적인 실험이라 볼 수 있다.

    -Principle 및 Theory
    가. immune synapse의 생물학적 의미
    면역세포들 간의 상호작용 목적으로 밀착결합을 한 결합복합체를 말한다. 대표적으로 T lymphocyte와 APC(Antigen Presenting Cell) 간의 상호작용을 두 세포 간의 밀착결합(면역 시냅스)을 예로 들 수 있다. 체내에 들어온 Antigen을 APC가 T cell에게 제시함으로써 APC와 T cell간 매우 tight하고 넓게 결합한 상호작용이 일어난다. 이렇게 세포와 세포 사이에 tight한 접합을 하고 있는 것을 ‘Immune synapse’라고 한다.

    나. Immune system의 F-actin의 역할
    F-actin은 면역세포의 dynamics에 관여하는 분자로 접합부위의 구조를 지지함으로써 시냅스 구조체 형성 및 유지에 중요한 역할을 한다. f-actin뿐만 아니라 세포부착에 관여하는 분자(LFA-1/ICAM-1 등)들은 T cell 활성의 플랫폼 역할을 하기 때문에 SMAC(SupraMolecular-Activation Cluster)이라 부르기도 한다. APC와 T cell이 접합을 하게 되면 micro domain이 접합 부위의 특정 위치로 모두 모여드는데, 이때 F-actin도 이 부위로 모여든다. 이렇게 T cell과 APC 사이의 접합이 얼마나 형성되었는지를 분석하기 위해서는 접합 부위 아래에 Actin polymerization 정도를 관찰하면 된다. 따라서 immunological synapse의 형성을 관찰하기 위해서는 actin polymer가 얼마나 많이 형성이 되었는가를 파악하면 된다.

    출처 : 해피캠퍼스

  • 한밭대학교 천연물화학 과제 Phalloidin / Phalloidin의 발견과 배경, 구조분석, 생합성 및 화학합성, 생화학적 기능 등

    목차

    1. 서론
    -Phalloidin의 소개
    -Phalloidin의 발견과 배경

    2. 본론
    -Phalloidin의 구조 분석
    -Phalloidin의 생합성 및 화학 합성
    -Phalloidin의 생화학적 기능
    -Phalloidin의 용도

    3. 결론 및 느낀점
    4. 참고문헌

    본문내용

    1). Phalloidin의 소개
    팔로이딘(Phalloidin)은 광대버섯(Amanita phalloides) 속의 독버섯에서 발견된 물질로, 7개의 아미노산으로 구성된 두고리 화합물(bicyclic heptapeptide)이다. 알광대버섯(Amanita phalloides)에서 유래한 독소를 아마니타 독소(amanita toxin)라 하며 이 독소는 사람에게 매우 치명적인 독소이다. Phalloidin은 다른 독성 물질과 달리 간세포만을 선택적으로 손상시키는 특성이 있으며, 이는 phalloidin 투여에 의해서 세포 원형질막의 변형이 간세포에 국한되고 타 세포에서는 일어나지 않기 때문으로 알려져 있다.
    또한, 팔로이딘은 F-actin(꼬인 섬유성 액틴)에 선택적으로 결합하여 필라멘트 말단으로부터 액틴 단량체의 해리를 억제하여 액틴 중합체를 안정화하는 기능을 한다. F-actin 중합체는 거의 모든 진핵 세포의 골격을 형성하기 때문에 형광 표지된 팔로이딘 접합체(Phalloidin conjugate)는 현미경을 사용하여 세포의 구조를 시각화하기 위한 유용한 probe가 될 수 있다.[1]

    그림1. Amanita phalloides

    그림2. 팔로이딘 구조식

    그림3. Phalloidin conjugates

    그림4. Phalloidin으로 염색 후 현미경으로 이미지화

    2). Phalloidin의 발견과 배경
    Phalloidin은 최초의 고리형 펩타이드 중 하나이다. 1937년 Feodor Lynen과 Ulrich Wieland가 광대버섯에서 분리하여 결정화하였다.[2] 이 구조의 특이한 점은 시스테인-트립토판 결합을 가지면서 이중 고리형 헵타펩타이드를 형성한다는 것이다. 이러한 결합은 Phalloidin의 구조를 특성화하기 어려워 난항을 겪었다. 이후 UV 분광법을 통해 트립토판 고리에 황이 존재함을 찾아냈고, 이 고리 구조가 약간 변화된 파장을 가지고 있다는 것을 발견했다.

    출처 : 해피캠퍼스