목차
1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 고찰
본문내용
1. 실험 목적
수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 Lowry 방법으로 정량한다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득한다.
2. 이론
단백질 정량은 단백질 발색반응을 이용해 흡광도를 측정함으로써 이루어진다. 단백질 양이 적 으면 흡광도도 적게 측정되고, 단백질 양이 많으면 흡광도도 크게 측정된다. 따라서 농도를 알고 있는 단백질의 흡광도를 측정해 표준 곡선을 얻은 후, 농도를 모르는 단백질의 흡광도를 측정하고 그 흡광도 값을 표준 곡선에 대입해 농도를 결정하는 식으로 과정이 진행된다.
자주 쓰이는 단백질 정량 방법들은 아래와 같다. 참고로, 아래 방법들은 발색 방법에만 차이 가 있으며 단백질 발색반응에 의한 흡광도 측정으로 농도를 결정하는 정량 원리는 서로 같다.
1. uv-vis spectroscopy
2. biuret protein assay
3. lowry protein assay
4. bca protein assay
5. bradford protein assay ←단백질 염색용 파란색 시약으로 발색시키는 방법
(*2,3,4번은 발색원리가 근본적으로 같으면서 조금씩의 변화만 있는 방법들이다. 모두 발색시약으로 구리를 사용하기에 파란색을 띈다.)
1 – uv-vis 파장에서 흡광도를 측정하는 방법으로, 별도의 발색 분자 없이도 사용 가능한 방 법이다 일반적으로 방향적 고리 화합물 등의 conjugated 이중결합이 있는 아미노산(ex. 페닐 알라닌, 티로신, 트립토판)이 많이 들어있으면 uv를 잘 흡수하기에 사용가능한 방법이다. 단백 질의 자외선 흡광은 280nm 파장에서 최대치를 가지며, 주어진 단백질을 구성하는 Tyr과 Trp 잔기의 개수를 알면 이론적인 자외선 흡광 계수를 구할 수 있다. 간단하고 빠르게 단백 질의 농도를 측정할 수 있는 방법이나, pH, 이온세기, 버퍼 등의 영향을 많이 받고 rough한 결과만 알 수 있다는 단점이 있다.
출처 : 해피캠퍼스
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