목차
1. 주제
2. 실험요약
3. 원리 및 배경지식
4. 실험 결과 및 Discussion
5. Reference
본문내용
1. 주제
SDS-PAGE 를 이용한 AP 단백질 분석 및 Coomassie Blue Staining
2. 실험 요약
(1) Gel cassette 조립
Resolving gel 과 stacking gel 을 부어 전체적인 gel 을 만들 수 있는 틀이 되는 gelcassette 를 먼저 조립한다. Gel 안에 먼저 등의 불순물이 들어가는 것을 방지하기 위해 에탄올을 이용하여 유리판의 먼지를 닦아준다. 유리판을 조립하고 고무 위에 고정한 후, 물질이 새지 않는지 D.W 를 넣어 확인한다. 물질이 새지 않는다는 것을 확인하면, D.W 를 따라 버린 후에 3M paper 을 이용하여 양 유리판의 물기를 제거한다.
(2) Gel 제작
SDS-PAGE 를 이용하여 단백질을 분석하기 위해서는 단백질 분석에 필요한 도구인 gel 을 제작해야 한다. 분석하고자 하는 단백질인 AP 단백질의 크기가 160-180kDa 이라는 것을 바탕으로 8% gel 을 제작하였다.
아래 표의 volume 을 바탕으로 먼저 50ml cornical tube 에 resolving gel 을 만든다.
그리고 이 용액을 voltexing 을 하여 잘 섞어준 후, 용액 약 4.7ml 를 gel cassette 에 loading 한다. 이렇게 loading 된 resolving gel 이 완전히 굳을 때까지 30-40 분 정도 기다린다.
Resolving gel 을 loading 하면서 생긴 기포를 정리하여 gel 을 평평하게 만들어주고, gel 이 마르는 것을 방지하기 위해 resolving gel 위에 isopropanol 약 1ml 를 loading 한다.
출처 : 해피캠퍼스
답글 남기기