목차
0. 실험목표
1. Introduction
2. Method
3. Discussion
4. Reference
본문내용
0. 실험목표
Western Blot을 통해 여러 단백질들이 혼합되어 있는 단백질 sample에서 원하는 특정 단백질의 존재 여부를 검출하고 이를 시각적으로 확인한다. SDS-PAGE를 이용하여 단백질을 크기 별로 분류하고, 분류된 단백질을 membrane으로 옮긴 후에 항원-항체 상보적 결합을 이용하여 단백질의 존재 여부를 시각화하여 결과를 확인한다.
1. Introduction
Western Blot은 gel 전기영동을 통해 단백질을 분리하고, 특정 단백질의 존재 여부를 확인하는 실험이다.
(1) Electrophoretic Separation: SDS-PAGE
Electrophoretic Separation는 protein solution을 gel에 loading하여 전극을 걸어주었을 때, poretin들이 크기에 따라 서로 다른 속도로 이동하는 성질을 이용하여 단백질을 분리하는 단백질 분석 방법이다. SDS-PAGE는 SDS라는 detergent를 사용하여 단백질의 구조를 선형으로 만듦으로써 단백질의 전하 밀도를 일정하게 만들고, 결국 단백질들이 크기로만 분류될 수 있게 한 전기영동 기법이다. Stacking gel과 Running gel에 각각 순서대로 80V와 120V를 걸어주면, 단백질들이 크기에 따른 이동 속도에 차이가 생겨 gel 내부에 크기별로 분류가 된다. 단백질의 분자량을 나타낸 marker를 통해 각 단백질이 얼마만큼의 분자량을 가지는지 확인할 수 있으며, 분자량에 해당하는 단백질을 역으로 찾아낼 수 있다.
(2) Transfer
앞서 SDS-PAGE를 이용해 크기별로 구분한 단백질을 membrane으로 옮기는 단계이다.
① 단백질이 옮겨지는 원리
출처 : 해피캠퍼스
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